應(yīng)《非洲豬瘟病毒在飼料、墊料和機(jī)械媒介中的生存及其在病毒傳播中的潛在作用》（GP/EFSA/ALPHA/2021/09）的要求，選擇相關(guān)飼料和墊料進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。所有基質(zhì)都被ASFV污染，并在5種不同的環(huán)境條件（-20℃、4℃、10℃、20℃和37℃）下保存長(zhǎng)達(dá)9個(gè)月。使用實(shí)時(shí)PCR和病毒分離技術(shù)在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)重復(fù)樣本進(jìn)行評(píng)估。此外，對(duì)三種類(lèi)型的吸血節(jié)肢動(dòng)物的可能作用進(jìn)行了評(píng)估。

詳細(xì)研究了代表性節(jié)肢動(dòng)物在以感染性血液為食后，病毒基因組和感染性病毒在體內(nèi)潛伏的時(shí)間。最后一步，獲得了進(jìn)一步的概念驗(yàn)證數(shù)據(jù)，證明節(jié)肢動(dòng)物通過(guò)攝入被ASFV污染的血液而傳播。總之，傳染性病毒的檢測(cè)在大多數(shù)基質(zhì)中相當(dāng)有限，而病毒基因組的檢測(cè)在整個(gè)研究期間是可能的。

然而，在較低的溫度下，病毒在飼料基質(zhì)上可以穩(wěn)定幾天甚至幾周，尤其是在甜菜和土豆上。青草、青貯草和青貯玉米在任何時(shí)間點(diǎn)都分離不到病毒。對(duì)該病毒在節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)可檢出性的研究表明，根據(jù)溫度和攝食量的不同，該病毒通常在一定時(shí)間內(nèi)可檢出。在低溫條件下，穩(wěn)蠅的病毒檢出率超過(guò)了預(yù)期，超過(guò)168小時(shí)。飼喂試驗(yàn)未導(dǎo)致豬感染。然而，這種概念驗(yàn)證研究的力量是有限的。

總結(jié)

在過(guò)去幾年中，非洲豬瘟（ASF）已成為大流行，在歐盟內(nèi)部受影響的野豬種群是該流行病的主要驅(qū)動(dòng)因素。這種情況帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)，即需要對(duì)在受影響地區(qū)收獲的農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，這些農(nóng)產(chǎn)品有可能接觸受影響動(dòng)物的尸體或體液。

為響應(yīng)“非洲豬瘟病毒在飼料、墊料和機(jī)械載體中的生存及其在病毒傳播中的潛在作用”（GP/EFSA/ALPHA/2021/09）的呼吁，該聯(lián)盟開(kāi)始提供關(guān)于非洲豬瘟病毒（ASFV）在植物源性飼料和墊層材料中的穩(wěn)定性和滅活（存活）的可靠數(shù)據(jù)。考慮到歐洲的生產(chǎn)參數(shù)，我們選擇了14種相關(guān)的飼料和墊料，即青草、青貯草、干草、樹(shù)皮、泥炭、木屑、青貯玉米、油菜籽、大麥、小麥、燕麥、秸稈、土豆和飼料用甜菜進(jìn)行了詳細(xì)的穩(wěn)定性試驗(yàn)。所有基質(zhì)都被ASFV人工污染，并在5種不同的環(huán)境條件（-20℃、4℃、10℃、20℃和37℃）下保存長(zhǎng)達(dá)9個(gè)月。

在不同的時(shí)間點(diǎn)使用實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行病毒基因組檢測(cè)和易感原代和/或永久細(xì)胞上的進(jìn)行病毒分離，評(píng)估重復(fù)樣本（至少在三次技術(shù)運(yùn)行中測(cè)試的生物三重副本）。為了便于對(duì)病毒分離的評(píng)估，采用適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)和/或熒光標(biāo)記的ASFV毒株加入陰性豬血中進(jìn)行篩選。對(duì)最近的德國(guó)ASFV毒株（來(lái)自受感染動(dòng)物的血液）重復(fù)了關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)。通過(guò)在干草、秸稈和小麥上使用有機(jī)酸來(lái)降低風(fēng)險(xiǎn)的概念驗(yàn)證完成了這些研究。

研究表明，在進(jìn)行穩(wěn)定性測(cè)試時(shí)，方法是一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題。盡管存在技術(shù)障礙，但使用原代細(xì)胞的現(xiàn)有系統(tǒng)提供了最敏感的結(jié)果，因此更可取。

病毒基因組的穩(wěn)定性被認(rèn)為是非常高的，因此病毒基因組可以在很寬的溫度范圍和很長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)到也就不足為奇了。青貯、青草和干草的基因組檢測(cè)比較困難。這些問(wèn)題只能通過(guò)適當(dāng)?shù)奶崛》椒▉?lái)部分克服。我們假設(shè)這些抑制作用仍然表明非常迅速的失活。

對(duì)于傳染性病毒的檢測(cè)情況則不同。盡管進(jìn)行了多次嘗試，但這種傳染性病毒只能在少數(shù)樣品中檢測(cè)到，而且只能在較低的溫度下檢測(cè)到。令人驚訝的是，這種病毒經(jīng)常在甜菜和土豆中被檢測(cè)到。在這里，病毒在代表深秋的低溫下存活了幾周。

墊料也得到了類(lèi)似的結(jié)果。病毒的檢測(cè)僅限于較低的儲(chǔ)存溫度和較短的時(shí)間。在4℃下，除一個(gè)樹(shù)皮樣品在28天后仍保持弱陽(yáng)性外，通常在7天后發(fā)生失活。即使在10℃下，7天后也只有樹(shù)皮檢測(cè)到了一次。在實(shí)驗(yàn)條件下，在中等溫度下保存總是適合于滅活病毒。用丙酸處理幾乎沒(méi)有額外的緩解效果，這與普遍較低的檢出率有關(guān)。

雖然公認(rèn)只有鳥(niǎo)thodoros屬的軟蜱可以作為非洲豬瘟病毒（ASFV）的有效生物載體，即復(fù)制病毒并維持其在其階段，但其他吸血節(jié)肢動(dòng)物作為機(jī)械載體的可能作用仍在討論中。特別是，在目前的非洲豬瘟流行中觀察到的季節(jié)性，在夏季的幾個(gè)月里，養(yǎng)豬場(chǎng)爆發(fā)的趨勢(shì)非常明顯，這提出了一個(gè)問(wèn)題，即節(jié)肢動(dòng)物媒介是否可以在疾病動(dòng)力學(xué)中發(fā)揮作用，作為感染野豬種群和家豬之間或家豬場(chǎng)內(nèi)部和之間的橋梁。該研究聯(lián)盟旨在提供關(guān)于機(jī)械媒介在非洲豬瘟傳播中的作用的可靠數(shù)據(jù)。詳細(xì)研究了代表性節(jié)肢動(dòng)物在食用感染性血液后攜帶感染性病毒的時(shí)間。為此，調(diào)查了白紋伊蚊和鈣紋伊蚊的實(shí)驗(yàn)室菌落以及野外捕獲的虻。

文章內(nèi)容轉(zhuǎn)自Sandra Blome, 7, 2024, Pig Progress